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Proveedor Auditado Introducción
La proteinasa K es una proteasa serina estable con amplia especificidad de sustrato. Degrada muchas proteínas en el estado nativo incluso en presencia de detergentes. No se activa por metaliones, agentes quelantes (por ejemplo, EDTA), reactivos sulfhidrilo, o por inhibidores de la quimotripsina del tripsinor. Es estable en un amplio rango de pH (4-12,5), con una actividad óptima a pH 6,5-9,5. La actividad se puede estimular mediante la adición de agentes desnaturalizantes (SDS y urea). La desnaturalización rápida de la enzima se produce a una temperatura superior a 70°C. La autólisis de la enzima ocurre cada vez más a pH alcalino.
Sin embargo, Proteinase K no está completamente inactivada por autólisis. Algunos fragmentos enzimáticos continúan manteniendo su actividad proteolítica completa, incluso después de una autólisis extensa.
La proteinasa K se utiliza con frecuencia en aplicaciones de biología molecular para digerir proteínas no deseadas, como nucleasas en preparaciones de ADN o ARN de microorganismos, células cultivadas y plantas. La enzima se utiliza típicamente a 50-200 μg/ml en preparaciones de ácido nucleico a pH 7,5-8,0 y 37-55°C. Los tiempos de incubación varían de 30 minutos a 18 horas.
Especificaciones
| Características | Especificaciones |
| Peso molecular | 29,3kDa |
| Punto isoeléctrico | 8,9 |
| Apariencia | Polvo liofilizado blanco |
| Pureza | 95% (análisis SDS-PAGE) |
| Actividad específica | ≥34 unidades/mg de proteína |
| Característica de temperatura | La temperatura de actividad efectiva es de 37-70°C, y la actividad enzimática a 65°C es el doble que a 25°C. |
| CARACTERÍSTICAS DEL PH | 4,0-12,0, el rango óptimo es ph7,5-11,5 |
| Condiciones de preservación |
Se recomienda almacenar a -20°C para garantizar la estabilidad de la actividad en la mayor medida posible (el transporte o almacenamiento a temperatura normal no reducirá la actividad enzimática). La vida útil es de hasta 3 años a -20°C y 2years a 2~8°C. |
| Método de uso |
Preparar 20mg/ml con la solución, añadir proteinasa K a la solución digestiva o lisar hasta que la concentración final sea de 50-200ug/ml e incubar a 55~70°C. La proteinasa K después de la reacción puede eliminarse o inactivarse mediante el método de microesferas magnéticas, el método de columna o la extracción de cloroformo fenol. La proteasa K puede ser inactivada por incubación a 95°C durante 3 minutos o 70°C durante 15 minutos. |
| Detección de residuos de ácidos nucleicos |
Qubit no detectó No se ha detectado la contaminación del ADN humano (PCR en tiempo real) No se ha detectado contaminación bacteriana por ADN (30 PCR de imprimación universal, 16S ciclos) No se ha detectado contaminación por ADN fúngico (ITS primer PCR) |
| Detección de nucleasas |
ADNasa no detectada ARNasa no detectada Nickase no detectado |
| Aplicación recomendada | Extracción de ácido nucleico, extracción de ADN circulante, extracción de ácido nucleico vírico |
Ventajas
| Contenido | C12100 | C12101 | C12102 |
| Proteinasa K, liofilizada, >30 unidades/mg de proteína | 1 g | 10 g | 100 g |
| Tampón PBD (20mm Tris, pH 7,5, 10mm CaCl2, 50% glicerol, 0,1% conservantes) | 1000 ml | 1000 ml | 1000 ml |
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