Kit de prueba de estreptomicina Elisa para miel

• Protección del medio ambiente: Sí
• Proceso de dar un título: ALCANZAR
• Color: Blanco
• Clasificación: Food Diagnostic
• Función: Food Testing
• No. de Modelo.: KA01904H
• Código del HS: 38229000

Descripción de Producto

Descripción del producto

Kit de inmunoensayo enzimático competitivo para
Análisis cuantitativo de estreptomicina  

1. Antecedentes
La estreptomicina es un antibiótico aminoglucósido, que se aplica ampliamente en el tratamiento de enfermedades animales. Dado que tiene neurotoxicidad y toxicidad renal, su residuo en los alimentos derivados de animales es nocivo para el ser humano; está estrictamente controlado en uso en la UE, EE.UU. Y China. Actualmente, ELISA es el enfoque común en la supervisión y control de la estreptomicina
Este kit es un nuevo producto para la detección de residuos de fármacos basado en la tecnología ELISA, que solo cuesta 45min en cada operación y puede minimizar considerablemente los errores de operación y la intensidad de trabajo.  
2. Principio de prueba
Este kit se basa en ELISA de competencia directa. Los pocillos de microtitulación están recubiertos con anticuerpo de acoplamiento. El residuo de estreptomicina en la muestra compite con el marcador enzimático recubierto en la placa de microtitulación para el anticuerpo. Después de la adición de conjugado enzimático , el sustrato cromogénico se utiliza para mostrar el color. La absorbancia de la muestra está negativamente relacionada con el residuo de estreptomicina que contiene, tras compararla con la curva estándar, multiplicada por el factor de dilución, se puede calcular la cantidad de residuos de estreptomicina en la muestra.
3. Aplicaciones
Este kit puede usarse en  análisis cuantitativo y cualitativo de residuos de estreptomicina en tejidos (cerdo, pollo, hígado), pescado y camarón, leche (leche cruda, Leche UHT, leche reconstituida, leche pasteurizada, bebida láctea),  suero, leche en polvo (leche entera en polvo, leche descremada en polvo), miel, jalea real, etc.
4. Reacciones cruzadas
Estreptomicina........................ 100,0%
Dihidroestreptomicina... …...106%
Sulfato de estreptomicina..................... 67%
Neomicina......... ….................... …<1%
Gentamicina..................... ….. …<1%
Kanamicina........................ …<1%
Amikacina.................... …...... <1%
Espectinomicina.............................. <1%
Apramicina............................... <1%

5. Materiales necesarios
5,1 equipos
----espectrofotómetro para placas de microtitulación (450nm/630nm)
----Homogenizador
---- mezclador vórtex
---- centrífuga
----equilibrio analítico (inductancia: 0,01g)
----pipeta graduada: 10ml
----Pipetón de goma
----tubo de centrifugación de poliestireno: 2mL, 50ml
----Micropipetas: 20μL-200μl, 100μl-1000μl
multipipeta 250μl  
5,2 reactivos
----ácido tricloroacético (AR)
----hidróxido de sodio (AR)
----agua desionizada
6. Componentes del kit

1. Placa de microtitulación con 96 pocillos recubiertos de antígeno
2. Soluciones estándar  (6 botellas × 1ml/botella)

0ppb,0,05ppb,0,15ppb,0,45ppb,1,35ppb,4,05ppb

1. Solución patrón de agujas: (1ml/botella) 1ppm
2.   Conjugado enzimático concentrado  1ml...….tapón rojo
3. Diluyente de conjugado enzimático 10ml....... tapa verde
4. Solución de sustrato A  7ml...... tapa blanca
5. Solución sustrato B  7ml.....tapón rojo
6. Solución de parada 7ml........…tapa amarilla
7. 20×solución de lavado concentrada 40ml

 cap. transparente

1. 2×solución de extracción concentrada 50ml

 ............................…tapa azul
7. Preparación de reactivos
Solución  1: 1% de ácido tricloroacético
Disolver 1,0g de ácido tricloroacético con 100ml de agua desionizada y mezclar completamente.
Solución  2: 1,5% de ácido tricloroacético
Disolver 1,5g de ácido tricloroacético con 100ml de agua desionizada y mezclar completamente.
Solución  3: 0,1mol/L NaOH
Disolver 0,4g de hidróxido de sodio con 100ml de agua desionizada y mezclar completamente.
Solución  4: Solución de extracción
Diluir la solución de extracción concentrada de 2×con agua desionizada en la proporción de volumen de 1:1, que se utilizará para la extracción de muestras; esta solución puede almacenarse a 4ºC durante 1 meses.
Solución 5: Solución de lavado
Diluir la solución de lavado concentrada de 20×con agua desionizada en la proporción de volumen de 1:19, que se utilizará para lavar las placas. Esta solución puede almacenarse a 4ºC durante 1 meses.
8. Preparaciones de muestra
8,1 Aviso y precauciones antes de la operación
(A) por favor, use puntas de una sola vez en el proceso de experimento, y cambie las puntas cuando absorba diferentes reactivos.
b) Asegúrese de que todos los instrumentos experimentales estén limpios;  de lo contrario, afectará al resultado del ensayo.
c) la muestra preparada debe usarse inmediatamente, no conservar más de 4h a temperatura ambiente.
8,2 tejido (cerdo, pollo, hígado)
----pesar 1,0±0,05g de muestra de tejido homogeneizada en un tubo de centrifugación de poliestireno 50ml, luego añadir 2ml de ácido tricloroacético al 1% (solución 1), vórtex para 5min para mezclar completamente.
---centrífuga para separación: 3000G / 5min / temperatura ambiente.
---tomar 100ml de sobrenadante, añadir 30ml de 0,1mol/L NaOH(solución 3), luego añadir 870ml de la solución de extracción(solución 4), vórtice para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50ml de la solución preparada para el ensayo.
Factor de dilución................... 30

8,3 Productos acuáticos
(1)Camarón
----pesar 1,0±0,05g de muestra de camarón homogeneizada en un tubo de centrifugación de poliestireno 50ml, luego añadir 2ml de ácido tricloroacético al 1% (solución 1), vórtex para 5min para mezclar completamente.
---centrífuga para separación: 3000G / 5min / temperatura ambiente.
---tomar 100ml de sobrenadante, añadir 30ml de 0,1mol/L NaOH(solución 3), luego añadir 870ml de la solución de extracción(solución 4), vórtice para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50ml de la solución preparada para el ensayo.
(2) pescado
----pesar 1,0±0,05g de muestra de pescado homogeneizada en un tubo de centrifugación de poliestireno 50ml, luego añadir 2ml de ácido tricloroacético al 1% (solución 1), vórtex para 5min para mezclar completamente.
---centrífuga para separación: 3000G / 5min / temperatura ambiente.
---tomar 100ml de sobrenadante, añadir 900ml de solución de extracción(solución 4), vórtice para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50ml de la solución preparada para el ensayo.
Factor de dilución................... 30

8,4 leche  (leche cruda, leche UHT, leche reconstituida, leche pasteurizada, bebida láctea),  suero
----Añadir  30ml de leche o de suero en un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml,
----Añadir  870ml de la solución de extracción (solución 4), vórtex para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50ml de la solución preparada para el ensayo.
Factor de dilución................... 30

8,5 leche en polvo
----pesar 1,0±0,05g de muestra de leche en polvo en un tubo de centrifugación de 50ml poliestireno, luego añadir 10ml de agua desionizada.  Agitar por 5min para mezclar completamente.
---tomar 100ml de sobrenadante, añadir 900ml de solución de extracción(solución 4), vórtice para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50ml de la solución preparada para el ensayo.
Factor de dilución................... 100

8,6Honey
----pesar 0,05g±1,0 muestra de miel en un tubo de centrífuga de 50ml poliestireno, luego añadir 4ml de agua desionizada, vórtex  para 5min hasta que la muestra se disuelva completamente.
---tomar 200ml de solución limpia, añadir 600ml de solución de extracción (solución 4), vórtex para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50ml de la solución preparada para el ensayo.

Factor de dilución................... 20

8,5  jalea real
----pesar 1,0±0,05g de la muestra de jalea real en un tubo de centrifugación de poliestireno 50ml.
----Añadir 3ml de ácido tricloroacético al 1,5% (solución 2), vórtex para 5min, y centrifugar a temperatura ambiente (20-25ºC) para 5min, a 3000g;
---- tomar 100ml  de la capa sobrenadante (evitar el objeto flotante), y mezclar con 110ml  de NaOH 0,1mol/L (solución  3), ajustar el pH a 6-8, luego añadir 790ml de la solución de extracción (solución 4), vórtex para 1min, mezclar completamente.
----tomar 50ml de la solución preparada para el ensayo.
Nota: Este método puede tener un efecto de fondo de 2ppb, lo que no afectará a la determinación de la muestra de acuerdo con los LMR.

Factor de dilución................... 30

9. Proceso de ensayo
9,1 Aviso antes del ensayo
9.1.1 Asegúrese de que todos los reactivos y micropocillos estén a temperatura ambiente (20-25ºC).
9.1.2 Volver todos los reactivos restantes a 2-8ºC inmediatamente después de su uso.
9.1.3 el lavado correcto de los micropocillos es un paso importante en el proceso de ensayo; es el factor vital para la reproducibilidad del análisis ELISA.
9.1.4 Evite la luz y cubra los micropocillos durante la incubación.
9,2 pasos de ensayo
9.2.1 saque todos los reactivos a temperatura ambiente (20-25ºC) durante más de 30min, agítelo suavemente antes de su uso.
9.2.2 saque los micropocillos necesarios y devuelva el resto a la bolsa de cierre a 2-8ºC inmediatamente.
9.2.3 la solución de lavado concentrada y la solución de extracción concentrada deben ser recombadas antes de su uso;
9.2.4 número: Numere cada posición de micropocillo y todos los patrones y muestras deben ser analizadas por duplicado. Registre las posiciones de las muestras y los estándares.
9.2.5 Añadir la solución patrón/muestra: Añadir 50µl de solución patrón o muestra preparada a los pocillos correspondientes.
9.2.6 diluir el conjugado enzimático concentrado: Mezclar el conjugado enzimático concentrado y el diluyente del conjugado enzimático en la relación de volumen de 1:10(p. ej 0,5ml de conjugado enzimático concentrado + 5ml de diluyente conjugado enzimático ), mezclar completamente, (esta mezcla no puede conservarse, usar inmediatamente).
9.2.7 Añadir el conjugado enzimático diluido (9,2.6): Añadir 50µl del conjugado enzimático diluido a cada pocillo, agitar la placa manualmente para mezclar y  después incubar durante 30min a 25ºC con la tapa.
9.2.8  lavar: Retirar la tapa suavemente y verter el líquido de los pocillos y enjuagar los micropocillos con 250µl de solución de lavado diluida (solución 5) en el intervalo de 10s durante 4-5 veces. Absorba el agua residual con papel absorbente (la burbuja de aire restante puede eliminarse con la punta no utilizada).
9.2.9  coloración: Añadir 50µl de solución A y 50µl de solución B a cada pocillo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente e incubar durante 15 min a 25ºC con la tapa (ver 12,8)
9.2.10  medida: Añadir 50µl de la solución de parada a cada pocillo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente y medir la absorbancia a 450nm (se sugiere medir con la doble longitud de onda de 450/630nm. Lea el resultado en 5min después de añadir la solución de parada.).
10. Resultados
10,1  Porcentaje de absorbancia
Los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se dividen por el valor de absorbancia del primer patrón (patrón cero) y se multiplican por 100%. El patrón cero se hace así igual al 100% y los valores de absorbancia se citan en porcentajes.
   
B --absorbancia del patrón (o muestra)
B0 --absorbancia  de patrón cero
10,2 curva estándar
----para trazar una curva estándar: Tomar el valor de absorbancia de los patrones como eje y, semi logarítmico de la concentración de la solución patrón de estreptomicina (ppb) como eje X.
---- la concentración de estreptomicina de cada muestra (ppb), que puede leerse en la curva de calibración, se multiplica por el factor de dilución correspondiente de cada muestra seguida, y se obtiene la concentración real de la muestra.
Por favor note:
Se ha desarrollado un programa informático especial para todos los análisis de datos,  que puede proporcionarse a petición.  
11. Sensibilidad, precisión y precisión
Sensibilidad de la prueba: 0,05ppb
Límite de detección
Tejido..................... ….………… 1,5ppb
Pescado y camarón... ….………… 1,5ppb
Leche, suero........................ …1,5ppb
Leche en polvo ................... …....... 5ppb Miel..................... ….…....... 1ppb
Jalea real.............................. …1,5ppb
Precisión
Tejido/pescado y camarón/suero/miel/jalea real................................................. 90±15%
Leche/leche en polvo......................................... …100±30%
Precisión
El coeficiente de variación del kit ELISA es inferior al 10%.

12. Aviso
12,1 los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se reducirán si los reactivos y las muestras no se han regulado a temperatura ambiente (20-25ºC).
12,2 no permita que los micropocillos se sequen entre pasos para evitar una reproducibilidad incorrecta y opere el siguiente paso inmediatamente después de tocar el soporte de micropocillos.
12,3. Agite  cada reactivo suavemente antes de usarlo.
12,4. Mantenga su piel alejada de la solución de parada porque es la solución 0,5m H2SO4.
12,5 no use los kits desfasados. No cambie los reactivos de diferentes lotes, ya que caerá la sensibilidad.
12,6 mantener los kits ELISA a 2-8ºC, no congelar. Selle las placas de micropocillos de reposo evite la luz solar directa para la muestra estándar y el reactivo cromogénico incoloro es sensible a la luz.
12,7 la solución sustrato debe abandonarse si se vuelve de color.los reactivos pueden volverse malos si el valor de absorbancia (450/630nm) del patrón cero es inferior a 0,5  (A450nm<0,5).
12,8 la reacción de coloración necesita 15 minutos después de añadir la solución A y la solución B. y puede prolongar el tiempo de incubación a 20min si el color es demasiado ligero para ser determinado. Nunca exceda de 25min, por el contrario, acorte el tiempo de incubación adecuadamente.
12,9 la temperatura de reacción óptima es de 25ºC. Una temperatura más alta o más baja producirá cambios en los valores de sensibilidad y absorbancia.
13. Almacenamiento
     Condiciones de almacenamiento: 2-8ºC.
Período de almacenamiento: 12months.

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