Sas 7-1 Kit de Prueba Elisa para Miel

• Personalización: Disponible
• Clasificación: diagnóstico de alimentos
• Marca Comercial: kwinbon
• No. de Modelo.: KA01103H
• Origen: China
• Código del HS: 38229000
• Capacidad de Producción: 50000pieces/año

Descripción de Producto

 

 

 

 

Descripción del producto

Kit de inmunoensayo enzimático competitivo para análisis cuantitativo de
Detección de residuos de sulfanilamida (SAS) (7 en 1)

1. Antecedentes
Las SA son bacteriófagos ampliamente aplicados, que son muy importantes en el control y curación de enfermedades animales. Estos medicamentos tienen efectos secundarios muy graves y conducirán a la resistencia de SAS de algunos bacilos si existen en el cuerpo humano por un período largo. También tienen carcinogenicidad potencial. Doc,235 del Ministerio de Agricultura prescribe que el límite de residuos de SAS es de 100mg/kg.
Este kit es un producto de nueva generación para la detección de residuos de fármacos basado en la tecnología ELISA. Es rápido, sencillo, preciso y sensible. Y requiere solo 45min en una operación, lo que minimiza considerablemente la intensidad de trabajo y el error de operación. Este kit está documentado en Doc,558 de MOA en octubre de 2005.
2. Principio de prueba
Este kit se basa en la tecnología ELISA indirecta-competitiva. Los pocillos de microtitulación están recubiertos con antígeno de acoplamiento. Los residuos de fármacos, incluidos la sulfamonometoxina, la sulfadiazina, el sulfametoxazol y el sulfatiazol, en la muestra compiten con el antígeno recubierto en la placa de microtitulación para el anticuerpo. Después de la adición de anti-anticuerpo marcado con enzima, el sustrato de TMB se utiliza para mostrar el color. La absorbancia de la muestra está negativamente relacionada con el SAS que reside en ella, después de comparar con la curva estándar, multiplicado por el factor de dilución, se puede calcular la cantidad de residuos SAS en la muestra.
3. Aplicaciones
Este kit puede utilizarse en análisis cuantitativos y cualitativos de residuos SAS (SMM, SD/SDZ, SMZ, ST, PST, Sulfametizol y sulfapiridina) en tejido (pollo, cerdo, pescado, camarón), miel, leche y orina.
4. Reacciones cruzadas
Sulfadiazina(SD o SDZ) …100,0%
Sulfamonometoxina (SMM) …137,0%
Sulfametoxazol (SMZ) ............... …335,0%
Sulfatiazol (ST).............................. 846,5%
Phtalilsulfatiazol (PST) …...... 840,4%
Sulfametizol .................... 120%
Sulfapiridina.................. …...... 46%
Sulfametazina ..................... ….12,5%
Sulfadimetoxina ..................... …<1%
Sulfaquinoxalina .................... <1%
Sulfamerazina …............................ …<1%
5. Materiales necesarios
5,1 equipos
Espectrofotómetro para placas de microtitulación (450nm/630nm)
Agitador
Mezclador vórtex
Centrifugar
Equilibrio analítico (inductancia: 0,01g)
Pipeta graduada: 10ml
Matraz aforado: 500ml
Tubos de centrífuga de poliestireno:2ml, 50ml
Micropipetas: 20ml-200ml, 100ml-1000ml
250ml -múltiple
5,2 reactivos
---- Acetonitrilo (AR)
---- acetato de etilo (AR)
---- N-hexano (AR)
----- fosfato de hidrógeno disodio 12-hidrato (AR)
---- dihidrógeno fosfato de sodio dihidrato (AR)
---- hidróxido de sodio (AR)
---- ácido clorhídrico concentrado (AR)
---- agua desionizada
6. Componentes del kit
Placa de microtitulación con 96 pocillos recubiertos de antígeno
Soluciones estándar (6 botellas × 1ml/botella)
  0ppb, 0,5ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb, 40,5ppb
Control estándar de agujas:(1ml/botella)   1ppm
Conjugado enzimático 7ml...…...... tapón rojo
Solución de anticuerpos 7ml ............green cap
Solución A 7ml..................tapón blanco
Solución B 7ml ......... tapa roja
Detener la solución 7ml ...........tapa amarilla
20×solución de lavado concentrada 40ml
.....................….....tapa transparente
2×solución de extracción 50ml......… tapón azul
7. Preparación de reactivos
Solución 1: 1m HCl
Medir 41,5ml ácido clorhídrico concentrado y diluir hasta 500ml con agua desionizada.
Solución 2: 1m NaOH         
Disolver 20,0g hidróxido de sodio con agua desionizada y diluir hasta 500 ml.
Solución 3: PH=6 solución tampón fosfato
     Pesar 1,75g fosfato de hidrógeno disodio 12-hidrato, 10,52g dihidrógeno fosfato de potasio dihidrato dihidrato, diluir con 500ml de agua desionizada.
Solución 4: Solución de extracción
Diluir la solución de extracción concentrada de 2×con agua desionizada en la ración de volumen de 1:1, que se utilizará para la extracción de muestras. Esta solución diluida puede conservarse durante 1 meses a 4ºC.
Solución 5: Solución de lavado
Diluir la solución de lavado concentrada de 20×con agua desionizada en la ración de volumen de 1:19, que se utilizará para lavar las placas. Esta solución diluida puede conservarse durante 1 meses a 4ºC.
8. Preparaciones de muestra
8,1 Aviso y precauciones para los usuarios antes de su uso:
(A) por favor, use puntas de una sola vez en el proceso de experimento, y cambie las puntas cuando absorba diferentes reactivos.
b) Asegúrese de que todos los instrumentos experimentales estén limpios.
c) las muestras que se traten con otros métodos pueden almacenarse a 4ºC durante 24 horas.
8,2 leche (leche cruda, leche UHT)
Diluir 50µl de muestra de leche cruda con 450µl de solución de extracción(solución 4), mezclar bien.
Tome 50ml de la solución preparada para el ensayo.

Factor de dilución:               10

3 tejidos (pollo, cerdo, pescado, camarón)
Homogeneizar la muestra con homogeneizador.
Pesar 0,05g±2,0 de homogeneizado en un tubo de centrífuga de poliestireno 50ml,
Añadir 4ml de pH=6 solución tampón fosfato(solución 3), agitar bien, añadir 6ml de acetato de etilo, agitar para 1min, y centrifugar para separación: 5min / 3000g / temperatura ambiente.
Llevar 3ml del líquido sobrenadante a un tubo de ensayo de vidrio limpio de 10ml, secarlo con un baño de agua de 50-60ºC bajo flujo de nitrógeno.
Añadir 1ml n-hexano,vórtice 30s para disolver el remanente seco, y luego añadir 1ml de la solución de extracción(solución 4), vórtex para 10s, centrifugar para la separación: 5min / 3000g / temperatura ambiente.
Retire la capa superior de la fase orgánica, tome 50ml de la capa inferior de la fase acuosa para el ensayo.
Factor de dilución:               1

8,4 Miel
Pesar 0,05g±1,0 de homogeneizado en un tubo de centrífuga de poliestireno 50ml,
Añadir 1ml de 1M HCl(solución 1), agitar para disolver la muestra completamente.
Incubar a 37ºC durante 30min.
Añadir 1ml de NaOH(solución 2), 1ml de pH=6 solución tampón fosfato(solución 3), 2ml de acetonitrilo y 6ml de acetato de etilo, agitar para 1min, y después centrifugar para la separación: 10min / 3000g / temperatura ambiente.
Lleve 4ml de la capa superior de la fase orgánica a un tubo de ensayo de vidrio limpio de 10ml, séquelo con un baño de agua de 50-60ºC bajo flujo de nitrógeno.
Añadir 0,5ml de la solución de extracción (solución 4), vorticial completamente.
Tome 50ml de la solución preparada para el ensayo.
Factor de dilución:               1

8,5 orina
Tomar 50ml de la muestra en un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml.
Añada 150ml de la solución de lavado (solución 5) y mezcle bien.
Tome 50ml de la solución preparada para el ensayo.
Factor de dilución:               4
9. Proceso de ensayo
9,1 Aviso antes del ensayo:
9.1.1 Asegúrese de que todos los reactivos y micropocillos estén a temperatura ambiente (20-25ºC).
9.1.2 Volver todos los reactivos restantes a 2-8ºC inmediatamente después de su uso.
9.1.3 el lavado correcto de los micropocillos es un paso importante en el proceso de ensayo; es el factor vital para la repetición del análisis ELISA.
9.1.4 Evite la luz y cubra los micropocillos durante la incubación.
9,2 pasos de ensayo
9.2.1 sacar todos los reactivos a temperatura ambiente (20-25ºC) durante más de 30min, homogeneizar antes de su uso.
9.2.2 saque los micropocillos necesarios y devuelva el resto a la bolsa de cierre a 2-8ºC inmediatamente.
9.2.3 la solución de lavado diluida debe ser rebañada para que esté a temperatura ambiente antes de su uso.
9.2.4 número: Numerado cada posición de micropocillos y todos los patrones y muestras deben ser analizadas por duplicado. Registre las posiciones de las muestras y los estándares.
9.2.5 Añadir solución/muestra patrón, conjugado enzimático y anticuerpo: Añadir 50µl de solución patrón (kit suministrado) o muestra preparada a los pocillos correspondientes. Se añaden 50µl de conjugado enzimático (kit suministrado), 50µl de solución de anticuerpo (kit suministrado). Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 30min a 25ºC con la cubierta.
9.2.6 lavar: Retirar la tapa suavemente y verter el líquido de los pocillos y enjuagar los micropocillos con 250µl de solución de lavado diluida (solución 5) en el intervalo de 10s durante 4 a 5 veces. Absorba el agua residual con papel absorbente (la burbuja de aire restante puede eliminarse con la punta no utilizada).
9.2.7 coloración: Añadir 50µl de solución A(Kit suministrado) y 50µl de solución B(Kit suministrado) a cada pocillo. Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 15min a 25ºC con la tapa (ver 12,8).
9.2.8 medida: Añadir 50µl de la solución de parada (kit suministrado) a cada pocillo. Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente y medir la absorbancia a 450nm contra un blanco de aire (se sugiere medir con la doble longitud de onda de 450/630nm. Leer el resultado en 5min después de añadir la solución de parada. ) (También podemos medir a la vista sin solución STOP en la abreviatura del instrumento ELIASA)
10. Resultados
10,1 Porcentaje de absorbancia
Los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se dividen por el valor de absorbancia del primer patrón (patrón cero) y se multiplican por 100%. El patrón cero se hace así igual al 100% y los valores de absorbancia se citan en porcentajes.

B --patrón de absorbancia (o muestra)
B0 --patrón de absorbancia cero
10,2 curva estándar
----para trazar una curva estándar: Tomar el valor de absorbancia de los patrones como eje y, semi logarítmico de la concentración de la solución de patrones SAS (ppb) como eje X.
---- la concentración SAS de cada muestra (ppb), que puede leerse en la curva de calibración, se multiplica por la correspondiente tasa de dilución de cada muestra seguida, y se obtiene la concentración real de la muestra.
Por favor note:
Se ha desarrollado un programa informático especial para todos los análisis de datos, que puede proporcionarse a petición.
11. Sensibilidad, precisión y precisión
Sensibilidad de la prueba: 0,5ppb
Límite de detección
Leche... …........ 5ppb
Tejido................... …...... 0,5ppb
Miel................... …...... 0,5ppb
Orina................... …......... 2ppb
Precisión
Leche... …...... ….…95±25%
Tejido.................... …......... …85±25%
Miel.................... …......... …85±25%
Orina... …............. ….95±25%
Precisión
El coeficiente de variación del kit ELISA es inferior al 10%.
12. Aviso
12,1 los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se reducirán si los reactivos y las muestras no se han regulado a temperatura ambiente (20-25ºC).
12,2 no permita que los micropocillos se sequen entre pasos para evitar repeticiones sin éxito y opere el siguiente paso inmediatamente después de tocar el soporte de micropocillos.
12,3. Homogeneizar cada reactivo antes de su uso.
12,4. Mantenga su piel alejada de la solución de parada porque es the2M H2SO4 solución.
12,5 no use los kits desfasados. No cambie los reactivos de diferentes lotes, o de lo contrario caerá la sensibilidad.
12,6 condición de almacenamiento:
Mantenga los kits ELISA a 2-8ºC, no los congele. Selle las placas de micropocillos de reposo evite la luz solar directa durante todas las incubaciones. Se recomienda cubrir las placas de microtitulación.
12,7 indicaciones de que los reactivos no se han dañado:
La solución de sustrato debe abandonarse si se vuelve de color.
Los reactivos pueden volverse malos si el valor de absorbancia (450/630nm) del patrón cero es inferior a 0,5(A450nm<0,5).
12,8 la reacción de coloración necesita 10-15min después de la adición de la solución A y la solución B; pero puede prolongar los rangos de tiempo de incubación de 20min a más si el color es demasiado ligero para ser determinado., nunca más de 30min,por el contrario, acortar el tiempo de incubación correctamente.
12,9 la temperatura de reacción óptima es de 25ºC. Una temperatura más alta o más baja producirá cambios en los valores de sensibilidad y absorbancia.
13. Condiciones de almacenamiento y período de almacenamiento
    Condiciones de almacenamiento: 2-8ºC.
Periodo de almacenamiento: 12 meses
 

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