Kit de prueba Elisa para fluoroquinolonas

• Personalización: Disponible
• Protección del medio ambiente: Sí
• Proceso de dar un título: ALCANZAR
• No. de Modelo.: KA00903H
• Color: Blanco
• Clasificación: diagnóstico de alimentos
• Función: análisis de alimentos
• Código del HS: 38229000

Descripción de Producto

 

Descripción del producto

Kit de inmunoensayo enzimático competitivo para
Análisis cuantitativo de fluoroquinolonas

1. Antecedentes
Las quinolonas (QNS) son una clase sintética de antibióticos, que actúan todos por inhibición de la girasa de ADN, suprimiendo su actividad al interferir con la reacción de reunión de ADN. Dado que la girasa es una enzima esencial en los procariotas pero no se encuentra en los eucariotas, las bacterias son  objetivos ideales para estos antibióticos. En la práctica veterinaria, se administran por inyección subcutánea al ganado, por vía intramuscular a los cerdos, y por vía oral al ganado, cerdos y pollos para el tratamiento de infecciones del tracto respiratorio y alimentario.
2. Principio de prueba
Este kit ELISA está diseñado para detectar quinolonas basadas en el principio  de  inmunoensayo enzimático competitivo. Los pocillos de microtitulación están recubiertos con antígeno de captura ligado a BSA. Las quinolonas de la muestra compiten con el antígeno recubierto en la placa de microtitulación para el anticuerpo. Después de la adición de conjugado enzimático, se utiliza sustrato cromogénico y la señal se mide por espectrofotómetro.  La absorción es inversamente proporcional a la concentración de quinolonas en la muestra.
3. Aplicaciones
Este kit se utiliza para el análisis cuantitativo y cualitativo de quinolonas en miel.
4. Reacciones cruzadas
Norfloxacin(NOR) …........ ….....100%
Pifloxacina............................................ 110%
Ofloxacina (OFL).................... ….. 100%
Lomefloxacino (LOM) ......... …............. 90%
Difloxacina (DIF).................. …...…...120%
Levofloxacina............................................... 110%
Enrofloxacina (ENR)............................. 130%
Ciprofloxacina (CIF) ............... …...... 100%
Sarafloxacina (SAR).................... ….....120%
Marbofloxacina............................................ 90%
Pazufloxacina.............................................. 80%
Flumequina (GRIPE)…................... …...95%
Enoxacina (ENO) …........ 100%

Danofloxacino (da)........................ ….90%
Ácido oxolínico (OXO) ............. ….. ….…100%
Fleroxacina... …...45%
Esparfloxacina.................................... 8%
5. Materiales necesarios
5,1 equipos
---espectrofotómetro para placa de microtitulación (450nm/630nm)
---evaporador rotatorio o instrumentos de secado de nitrógeno
---Homogenizador / estomador
---agitador
---agitador vórtex
---centrífuga
---equilibrio analítico (inductancia: 0,01g)
---pipeta graduada: 10ml
---Pipetón de goma
---matraz aforado: 100ml, 400ml,500ml
---tubo de ensayo de vidrio: 10ml
---tubo de centrifugación de poliestireno:2ml,  15ml, 50ml
---Micropipetas: 20uL-200ul,
100ul-1000ul, 250ul-multipipeta
5,2 reactivos
---agua desionizada
6. Componentes del kit

1. Placa de microtitulación recubierta de antígeno,  96wells.
2. Soluciones estándar×6 botellas: (1ml/botella)

0ppb, 0,1ppb, 0,3ppb,  0,9ppb,  2,7ppb,  8,1ppb

1.  Solución patrón de espiado: 1ml, 100ppb
2.  Conjugado enzimático concentrado  (1ml)... tapón rojo
3. Solución de anticuerpos (7ml)........................green cap
4. Solución sustrato A (7ml)... tapón blanco
5. Solución sustrato B (7ml)...... tapa roja
6. Solución de parada (7ml).........tapa amarilla
7. 20×solución de lavado concentrada(40ml)

 ........................tapa transparente
Solución de extracción(50ml).................................tapón azul  
7. Preparación de reactivos
7,1 solución de lavado: Diluir la solución de lavado concentrada de 20×con agua desionizada (1:19), que se utilizará para lavar la placa. La solución de lavado puede conservarse durante un mes a 4ºC.
8. Preparación de la muestra
8,1 Aviso y precauciones  antes de la operación
(A) por favor, use puntas de una sola vez en el proceso de experimento, y cambie las puntas cuando absorba diferentes reactivos.
b) por favor, compruebe si todas las herramientas experimentales están limpias y purificarlas si es necesario, lo que no interfiere con los resultados.
c) almacenar la muestra no tratada en congelación.
D) la muestra tratada puede almacenarse durante 24 horas, a 2-8ºC en la oscuridad, excepto el suero.
e) el conjugado enzimático debe prepararse recién antes de su uso.
8,2 Miel
----tomar miel de 1,0±0,05g en un tubo de 10ml.
----Añadir 4ml agua desionizada, vórtice para 5min para disolverlo completamente.
---- tomar 500uL muestras disueltas, mezclar con 500uL solución de extracción y vórtex para 3min.
----tomar 50uL por pocillo para el ensayo.
9. Pasos del ensayo
9,1 Aviso antes del ensayo:
9.1.1 mantenga todos los reactivos y micropocillos a temperatura ambiente (20-25ºC) durante más de 30min hasta que se rectienten.
9.1.2 Volver todos los reactivos restantes a 2-8ºC inmediatamente después de su uso.
9.1.3 lavar los micropocillos correctamente es un punto importante en el proceso de ensayo, es un factor vital para la reproducibilidad del análisis ELISA
9.1.4 cubra los micropocillos durante la incubación.
9,2 proceso de ensayo
9.2.1 llevar todos los reactivos a temperatura ambiente (20-25ºC) durante más de 30min, y agitar suavemente antes de su uso.
9.2.2 saque los micropocillos necesarios y devuelva el resto a la bolsa con cierre de cremallera y almacene inmediatamente a 2-8ºC.
9.2.3  número: Introduzca un número suficiente de pocillos en el soporte del micropocillo para que todos los patrones y muestras se puedan procesar por duplicado. Registre la posición de los estándares y las muestras.
9.2.4 Añadir muestra / patrón:  Añadir 50µl de cada solución patrón o muestra preparada para separar los pocillos duplicados.
9.2.5 mezclar solución enzimática y anticuerpo: Diluir el conjugado enzimático concentrado con solución de anticuerpo en la relación de volumen de 1:10 según su uso (conjugado enzimático concentrado de 1 veces + solución de anticuerpo de 10 pliegues), mezclar completamente (esta solución debe usarse inmediatamente )
9.2.6 Añada  la mezcla de enzimas y anticuerpos: Añada 50µl   de conjugado enzimático y mezcla de anticuerpos a cada pocillo inmediatamente, mezcle suavemente e incube durante 30min a 25ºC con la cubierta.
9.2.6 lavar: Retirar la tapa suavemente y limpiar el líquido de los pocillos y lavar los micropocillos con 250µl de solución de lavado diluida a intervalos de 10s. Golpee el soporte de micropocillos boca abajo con fuerza contra el papel absorbente para garantizar la eliminación completa del líquido de los pocillos (repita 4-5 veces).
9.2.7 coloración: Añadir 50µl solución A y 50µl solución B a cada pocillo. Mezclar suavemente e incubar para 15min a 25ºC con tapa (ver 12,8).
9.2.8 medida: Añadir 50µl de la solución de parada a cada pocillo. Mezclar suavemente y medir la absorbancia a 450nm contra un blanco de aire  (se sugiere medir con  la longitud de onda doble de 450  /  630nm, leer el resultado en 5min después de añadir solución de parada)  
10. Resultados
10,1 Porcentaje de absorbancia
Los valores medios de absorbancia obtenidos de los patrones y de las muestras se dividen por el valor de absorbancia del primer patrón (patrón cero) y se multiplican por 100%.
   =
B --absorbancia de patrones o muestras
B0 --absorbancia de patrón cero
10,2 curva estándar
---para dibujar una curva estándar: El valor de ausencia de los patrones como eje y, semilogarítmico de la concentración de los patrones (ppb) como eje x.
---la  concentración de quinolonas de cada muestra (ppb), que puede leerse en la curva de calibración, se multiplica por la correspondiente tasa de dilución de cada muestra seguida, y se obtiene la concentración real de la muestra.
Aviso:  Se ha desarrollado un software especial para el cálculo de resultados,  que puede proporcionarse a petición.
Factor de dilución de la muestra:  

Miel: 10
11. Sensibilidad, precisión y precisión
Sensibilidad de la prueba: 0,1ppb
Límite de detección de muestras:
Miel...............................1 ppb
Precisión:
Miel..................... …100 ± 20%
Precisión:
CV del kit ELISA todo menos del 10%.
12. Aviso
12,1 los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se reducirán si los reactivos y las muestras no se han regulado a temperatura ambiente (20-25ºC).
12,2 no permita que los micropocillos se sequen entre pasos para evitar repeticiones sin éxito y opere el siguiente paso inmediatamente después de tocar el soporte de micropocillos.
12,3 mezclar el homogeneizado y eluir la placa adecuadamente. 12,4 Evite que la solución de parada toque la piel porque es 2M
     H2SO4.
12,5 no use los kits desfasados. No cambie los reactivos de diferentes lotes, o de lo contrario caerá la sensibilidad.
12,6 mantenga los kits ELISA a 2-8ºC. Evite la luz solar directa durante todas las incubaciones. Se recomienda cubrir las placas de microtitulación.
12,7 la solución sustrato debe abandonarse si se vuelve de color.  Los reactivos pueden deteriorarse  si el valor de absorbancia (450/630nm) del patrón cero es inferior a 0,5  (A450nm<0,5).
12,8 la reacción de coloración necesita 10-15min después de la adición de la solución A y la solución B; pero puede prolongar los intervalos de tiempo de incubación  a 20min si el color es demasiado ligero para ser determinado.  Nunca exceda 25min.  Por el contrario, acorte el tiempo de incubación adecuadamente.
12,9 la mejor temperatura de reacción es 25ºC, la temperatura demasiado alta o demasiado baja ambos conducirán a los cambios de sensibilidad y de los valores de absorbancia.
13. Condiciones de almacenamiento y período de almacenamiento
Condiciones de almacenamiento: 2-8ºC.
Período de almacenamiento: 12 meses.

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