ELISA Test Kit para Amoxicillin

• Environmental Protection: Yes
• Certification: REACH
• Color: White
• Classification: Food Diagnostic
• Function: Food Testing
• Appearance: Liquid
• No. de Modelo.: KA10101H
• Paquete de Transporte: Foam Box with Ice Bag
• Marca Comercial: kwinbon
• Origen: China
• Código del HS: 38229000
• Capacidad de Producción: 50000PCS/Year

Descripción de Producto

Descripción del producto

Kit de inmunoensayo enzimático competitivo para  
Análisis cuantitativo de Amoxicillin

1. Antecedentes
La amoxicilina, también deletreada amoxicilina, es un antibiótico útil para el tratamiento de una serie de infecciones bacterianas. Es el tratamiento de primera línea para las infecciones del oído medio. También se puede usar para estreptococos de garganta, neumonía, infecciones de piel e infecciones del tracto urinario, entre otros. Se toma por vía oral o menos comúnmente por inyección.
Los efectos secundarios comunes incluyen náuseas y erupción cutánea. También puede aumentar el riesgo de infecciones por levaduras y, cuando se usa en combinación con ácido clavulánico, diarrea. No debe usarse en aquellos que son alérgicos a la penicilina. Aunque se puede usar en personas con problemas renales, es posible que sea necesario disminuir la dosis. Su uso en el embarazo y la lactancia no parece ser perjudicial.
2. Principio de prueba
Este kit se basa en   la tecnología ELISA indirecta-competitiva. Los pocillos de microtitulación están recubiertos con antígeno de acoplamiento. El residuo de amoxicilina en la muestra compite con el antígeno recubierto en la placa de microtitulación para el anticuerpo.  Después de la adición de conjugado enzimático, el sustrato de TMB  se utiliza para mostrar el color. La absorbancia de la muestra está negativamente relacionada con la Amoxicilina en ella, después de comparar con la curva estándar, multiplicada por el factor de dilución, se  puede calcular la cantidad de Amoxicilina en la muestra.
3. Aplicaciones
Este kit puede usarse en  análisis cuantitativo y cualitativo de Amoxicillin en  tejidos animales (cerdo, pollo) , leche y huevo.
4. Reacciones cruzadas
Amoxicilina…...... ….................... 100%
5. Materiales necesarios
5,1 equipos
----espectrofotómetro para placas de microtitulación (450nm/630nm)
----evaporador rotatorio o sistema de secado de gas nitrógeno
----Homogenizador
--------------
---- mezclador vórtex
---- centrífuga
----equilibrio analítico (inductancia: 0,01g)
----pipeta graduada: 10ml
----Pipetón de goma
----tubos de centrífuga de poliestireno: 2mL, 50ml
----tubo de ensayo de vidrio: 10ml
----matraz aforado: 100ml, 500ml
----Micropipetas: 20uL-200ul,100uL-1000ul,
250ul-multipipeta
5,2 reactivos
----- fosfato de hidrógeno disodio 12-hidrato
(Na2HPO4▪12 H2O, AR)
----- Dihidrógeno fosfato de sodio  deshidratado
 (NaH2PO4, AR)
---- metanol (AR)
----agua desionizada
6. Componentes del kit

1. Placa de microtitulación con 96 pocillos recubiertos de antígeno
2. Soluciones estándar. (6×1ml botellas)

0 ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb, 40,5ppb, 121,5 ppb

1. Solución patrón de espiado: 1ml, 1ppm
2.  Conjugado enzimático (12ml)…............
3. Solución de anticuerpo (7ml)..............green cap
4. Solución A (7ml) ..................tapa blanca
5. Solución B (7ml) ........................ tapa roja
6. Solución de tope (7ml) ...............tapón amarillo
7. 20× solución de lavado concentrada (40ml)

.................... tapa transparente

1. 2×solución de extracción concentrada (50ml)

 ............................… tapa azul
7. Preparación de reactivos
Solución 1: PH=7,2   0,02 M PBS
Pesar 2,58g  Na2HPO4▪12H2O y 0,435g  NaH2PO4, diluir con agua desionizada hasta 500ml.
Solución 2:   PBS 0,03 M.
Pesar 3,87g  Na2HPO4▪12H2O y 0,654g  NaH2PO4, diluir con agua desionizada hasta 500ml.
Solución 3:  Solución de extracción de tejidos
     Mezclar 2 de metanol y 70ml de 0,03M PBS(solución 10ml) completamente.
Solución 4:  Solución de extracción de leche cruda
     Mezclar 1 de metanol y 2ml de 0,02M PBS(solución 8ml) completamente.
Solución 5:  UHT solución de extracción de leche  
     Mezclar 1 de metanol y 7ml de 0,02M PBS(solución 3ml) completamente.
Solución 6:  Solución de extracción
Diluir la solución de extracción concentrada de 2×con agua desionizada en la proporción de volumen de 1:1(p. ej 10ml de 10ml×solución de extracción + 2 de agua desionizada), que se utilizará para la extracción de muestras, esta solución puede almacenarse a 4ºC durante 1 meses.
Solución 7:  Solución de lavado
Diluir la solución de lavado concentrada de 20×con agua desionizada en la proporción de volumen de 1:19(p. ej 5ml de 95ml×solución de lavado + 20 de agua desionizada), que se utilizará para lavar las placas. Esta solución puede almacenarse a 4ºC durante 1 meses.
8. Preparaciones de muestra
8,1 Aviso y precauciones antes de la operación
(A) por favor, use puntas de una sola vez en el proceso de experimento, y cambie las puntas cuando absorba diferentes reactivos.
b) Asegúrese de que todos los instrumentos experimentales estén limpios.
8,2 tejido (cerdo, pollo)
----tomar 2,0±0,05g de muestra de tejido homogeneizada en un tubo de 50ml, luego añadir 8ml de solución de extracción de tejido (solución 3), agitar para 5min, y luego centrifugar para separación: 3000G / temperatura ambiente / 5min..  
----transferir 500µl del supernato a un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml, añadir 500µl de solución de extracción (solución 6), vórtex para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50µl por pocillo para el ensayo.

Factor de dilución:               10

8,3 leche
8.3.1 leche cruda
------ tomar 1ml de leche en  un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml, añadir 1ml  de solución de extracción de leche cruda(solución 4), vórtex para 30s para mezclar completamente.
----transferir 500μl de la solución a un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml, añadir 500μl de solución de extracción(extracción 6), vórtex para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50µl por pocillo para el ensayo.
8.3.2 leche UHT
------ tomar 1ml de leche UHT en  un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml, añadir 1ml  de solución de extracción de leche UHT(solución 5), vórtex para 30s para mezclar completamente.
----transferir 500μl de la solución a un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml, añadir 500μl de solución de extracción (solución 6), vórtex para 30s para mezclar completamente.
----tomar 50µl por pocillo para el ensayo.

Factor de dilución:               4

8,4 huevo
----homogeneizar la clara de huevo y la yema con homogeneizador.
----pesar 1,0±0,05g  del homogeneizado en un tubo de centrifugación de poliestireno 10ml, añadir 2ml de agua desionizada, vórtex para 1min, luego centrifugar: 5min / 3000g / 20-25ºC.
----transferir 200µl del supernato a un tubo de centrifugación de poliestireno 2ml, añadir 200µl de solución de extracción(solución 6), agitar por 1min para mezclar completamente(la solución preparada debe ser blanca o amarilla).
----tomar 50µl por pocillo para el ensayo.

Factor de dilución:               6

9. Proceso de ensayo
9,1 Aviso antes del ensayo
9.1.1 Asegúrese de que todos los reactivos y micropocillos estén a temperatura ambiente (20-25ºC).
9.1.2 Volver todos los reactivos restantes a 2-8ºC inmediatamente después de su uso.
9.1.3 el lavado correcto de los micropocillos es un paso importante en el proceso de ensayo; es el factor vital para la reproducibilidad del análisis ELISA.
9.1.4 Evite la luz y cubra los micropocillos durante la incubación.
9,2 pasos de ensayo
9.2.1 sacar todos los reactivos a temperatura ambiente (20-25ºC) durante más de 30min, homogeneizar antes de su uso.
9.2.2 saque los micropocillos necesarios y devuelva el resto a la bolsa de cierre a 2-8ºC inmediatamente.
9.2.3 la solución de lavado diluida debe ser rebañada para que esté a temperatura ambiente antes de su uso.
9.2.4 número: Numerado cada posición de micropocillos y todos los patrones y muestras deben ser analizadas por duplicado. Registre las posiciones de las muestras y los estándares.
9.2.5 Añadir solución/muestra patrón y solución de anticuerpos: Añadir 50µl de solución patrón (kit suministrado) o muestra preparada a los pocillos correspondientes. Añada 50µl de solución de anticuerpo (kit suministrado). Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 30min a 25ºC con la cubierta.
9.2.6  lavar: Retirar la tapa suavemente y verter el líquido de los pocillos y enjuagar los micropocillos con 250µl de solución de lavado diluida (solución 7) en el intervalo  de 10s durante 4-5 veces.  Absorba el agua residual con papel absorbente (la burbuja de aire restante puede eliminarse con la punta no utilizada).
9.2.7 Añadir conjugado enzimático:  Añadir  100μl  de conjugado enzimático (kit suministrado) a cada pocillo, mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 30min a 25ºC con la cubierta.  Repita el paso de lavado de nuevo.
9.2.8 coloración: Añadir 50µl de solución A(Kit suministrado) y 50µl de solución B(Kit suministrado) a cada pocillo. Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 15min a 25ºC con la cubierta (ver 12,8).
9.2.9  medida: Añadir 50µl de solución de parada (kit suministrado) a cada pocillo. Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente y medir la absorbancia a 450nm (se sugiere medir con la doble longitud de onda de 450/630nm. Leer el resultado en 5min después de añadir la solución de parada).  
10. Resultados
10,1 Porcentaje de absorbancia
Los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se dividen por el valor de absorbancia del primer patrón (patrón cero) y se multiplican por 100%. El patrón cero se hace así igual al 100% y los valores de absorbancia se citan en porcentajes.
   
B --patrón de absorbancia (o muestra)
B0 --patrón de absorbancia cero
10,2 curva estándar
----para trazar una curva estándar: Tomar  el valor de absorbancia de los patrones como eje y, semi logarítmico de la concentración de  la solución patrón de amoxicilina (ppb) como eje X.
---- la concentración de amoxicilina de cada muestra (ppb), que puede leerse en la curva de calibración, se multiplica por el factor de dilución correspondiente de cada muestra seguida, y se obtiene la concentración real de la muestra.
Por favor note:
Para la evaluación del resultado, se ha desarrollado un programa informático especial, que puede proporcionarse a petición.
11. Sensibilidad, precisión y precisión
Sensibilidad de la prueba: 1,5ppb
Límite de detección
Tejido animal........... …......... 15ppb
Leche............................ …………… 6ppb
Huevo..................... …...... 9ppb
Precisión
Tejido (pollo) …........ …...... …100±20%
Tejido (cerdo) …............. …......…90±20%
Leche (leche cruda) …........... …. 100±20%
Leche (leche UHT).................... …...90±20%
Huevo..................... …........ 100±20%
Precisión
El coeficiente de variación del kit ELISA es inferior al 10%.
12. Aviso
12,1 los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se reducirán si los reactivos y las muestras no se han regulado a temperatura ambiente (20-25ºC).
12,2 no permita que los micropocillos se sequen entre pasos para evitar una reproducibilidad incorrecta y opere el siguiente paso inmediatamente después de tocar el soporte de micropocillos.
12,3. Agite cada reactivo suavemente antes de usarlo.
12,4. Mantenga su piel alejada de la solución de parada porque es la solución 0,5m H2SO4.
12,5 no use los kits desfasados. No cambie los reactivos de diferentes lotes, o de lo contrario caerá la sensibilidad.
12,6 mantener los kits ELISA a 2-8ºC, no congelar. Selle las placas de micropocillos de reposo, evite la luz solar directa durante todas las incubaciones. Se recomienda cubrir las placas de microtitulación.
12,7  la solución sustrato debe abandonarse si se vuelve de color.  Los reactivos pueden volverse malos si el valor de absorbancia (450/630nm) del patrón cero es inferior a 0,5(A450nm<0,5).
12,8 la reacción de coloración necesita  15min después de la adición de la solución A y la solución B. y usted puede prolongar el tiempo de incubación de 20min a más si el color es demasiado ligero para ser determinado. Nunca exceda de 25min, por el contrario, acorte el tiempo de incubación adecuadamente.
13. Almacenamiento
    Condiciones de almacenamiento: 2-8ºC.
Periodo de almacenamiento: 12 meses
 

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