Kit de prueba ELISA para cefalosporinas

• Protección del medio ambiente: Sí
• Proceso de dar un título: ALCANZAR
• Color: Blanco
• Clasificación: Food Diagnostic
• Función: Food Testing
• Apariencia: Líquido
• No. de Modelo.: KA11001H
• Paquete de Transporte: Foam Box with Ice Bag
• Marca Comercial: kwinbon
• Origen: China
• Código del HS: 38229000
• Capacidad de Producción: 50000PCS/Year

Descripción de Producto

Descripción del producto

 

Kit de inmunoensayo enzimático competitivo para  
Análisis cuantitativo de cefalosporinas

1. Antecedentes
Las cefalosporinas son una clase de antibióticos β-lactam originariamente derivados del Acremonium, que anteriormente se conocía como "Cephalosporium".  Junto con las cefamicinas constituyen un subgrupo de antibióticos β-lactam llamado cefemas.
El kit ELISA es un nuevo producto basado en la tecnología ELISA, que es rápido, fácil, preciso y sensible en comparación con el análisis instrumental común y solo necesita 1,5h en una sola secuencia, por lo que puede minimizar considerablemente los errores de operación y la intensidad de trabajo.
2. Principio de prueba
Este kit se basa en   la tecnología ELISA indirecta-competitiva. Los pocillos de microtitulación están recubiertos con antígeno de acoplamiento. El residuo de cefalosporinas en la muestra compite con el antígeno recubierto en la placa de microtitulación para el anticuerpo.  Después de la adición de conjugado enzimático, el sustrato de TMB  se utiliza para mostrar el color. La absorbancia de la muestra está negativamente relacionada con las cefalosporinas que contiene, después de compararla con la curva estándar, multiplicada por el factor de dilución, se puede calcular la cantidad de cefalosporinas en la muestra.
3. Aplicaciones
Este kit puede usarse en  análisis cuantitativo y cualitativo de cefalosporinas en  tejidos animales (cerdo, pollo, carne de vacuno, pescado y camarón)  y leche.
4. Reacciones cruzadas
Ceftiofur...... ….................... 100%
Ceftriaxona.................... ….. 169%
Cefotaxima............................. …...63%
Cefazolina............................. ….…<0,1%
5. Materiales necesarios
5,1 equipos
----espectrofotómetro para placas de microtitulación (450nm/630nm)
----evaporador rotatorio o sistema de secado de gas nitrógeno
----Homogenizador
--------------
---- mezclador vórtex
---- centrífuga
----equilibrio analítico (inductancia: 0,01g)
----pipeta graduada: 10ml
----Pipetón de goma
----tubos de centrífuga de poliestireno: 2mL, 50ml
----tubo de ensayo de vidrio: 10ml
----matraz aforado: 100ml, 500ml
----Micropipetas: 20uL-200ul,100uL-1000ul,
250ul-multipipeta
5,2 reactivos
----ácido clorhídrico concentrado (HCl, AR)
----Acetonitrilo (AR)
----N-hexano (AR)
----agua desionizada
6. Componentes del kit

1. Placa de microtitulación con 96 pocillos recubiertos de antígeno
2.  Soluciones estándar de ceftiofur. (6×1ml botellas)

0 ppb, 0,5ppb, 1,5ppb, 4,5ppb, 13,5ppb, 40,5 ppb

1. Solución patrón de espiado: 1ml, 1ppm
2.  Conjugado enzimático (12ml)…............
3. Solución de anticuerpo (7ml)..............green cap
4. Solución A (7ml) ..................tapa blanca
5. Solución B (7ml) ........................ tapa roja
6. Solución de tope (7ml) ...............tapón amarillo
7. 20× solución de lavado concentrada (40ml)

.................... tapa transparente

1. 2×solución de extracción concentrada (50ml)

 ............................… tapa azul
7. Preparación de reactivos
Solución 1: 0,05M HCl
Diluir 2,1ml de HCl concentrado con agua hasta 500ml.
Solución 2: Tampón de extracción de muestras
Mezclar 80ml de acetonitrilo con 20ml de 0,05M solución de HCl.
Solución 3:  Solución de extracción
Diluir la solución de extracción concentrada de 2×con agua desionizada en la proporción de volumen de 1:1(p. ej 10ml de 10ml×solución de extracción + 2 de agua desionizada), que se utilizará para la extracción de muestras, esta solución puede almacenarse a 4ºC durante 1 meses.
Solución 4:  Solución de lavado
Diluir la solución de lavado concentrada de 20×con agua desionizada en la proporción de volumen de 1:19(p. ej 5ml de 95ml×solución de lavado + 20 de agua desionizada), que se utilizará para lavar las placas. Esta solución puede almacenarse a 4ºC durante 1 meses.
8. Preparaciones de muestra
8,1 Aviso y precauciones antes de la operación
(A) por favor, use puntas de una sola vez en el proceso de experimento, y cambie las puntas cuando absorba diferentes reactivos.
b) Asegúrese de que todos los instrumentos experimentales estén limpios.
8,2 tejidos (cerdo, pollo, carne de vacuno, pescado y camarón):
----tomar 2,0±0,05g de muestra de tejido homogeneizada en un tubo de 50ml, añadir 8ml de tampón de extracción de la muestra (solución 2), agitar para 5min y después centrifugar para separación: 3000G / temperatura ambiente / 5min..  
----transferencia 1ml del supernato en un tubo de vidrio limpio 10ml, seco con 50-60ºC de agua bajo flujo de gas nitrógeno.
----Añadir 1ml de n-hexano, vórtex para 30s, luego añadir 1ml de la solución de extracción (solución 3), vórtex para 30s para disolver completamente, centrifugar para la separación: 3000G / temperatura ambiente / 5min..
----retire la capa superior de n-hexano y tome 50µl de la capa acuosa inferior por pocillo para el ensayo.

Factor de dilución:      4

8,2 leche
----- tomar 100µl de leche cruda en 2ml tubo, y añadir 900µl de solución de extracción (solución 3), luego mezclar completamente.
----tomar 50µl por pocillo para el ensayo.

Factor de dilución:      10

9. Proceso de ensayo
9,1 Aviso antes del ensayo
9.1.1 Asegúrese de que todos los reactivos y micropocillos estén a temperatura ambiente (20-25ºC).
9.1.2 Volver todos los reactivos restantes a 2-8ºC inmediatamente después de su uso.
9.1.3 el lavado correcto de los micropocillos es un paso importante en el proceso de ensayo; es el factor vital para la reproducibilidad del análisis ELISA.
9.1.4 Evite la luz y cubra los micropocillos durante la incubación.
9,2 pasos de ensayo
9.2.1 sacar todos los reactivos a temperatura ambiente (20-25ºC) durante más de 30min, homogeneizar antes de su uso.
9.2.2 saque los micropocillos necesarios y devuelva el resto a la bolsa de cierre a 2-8ºC inmediatamente.
9.2.3 la solución de lavado diluida debe ser rebañada para que esté a temperatura ambiente antes de su uso.
9.2.4 número: Numerado cada posición de micropocillos y todos los patrones y muestras deben ser analizadas por duplicado. Registre las posiciones de las muestras y los estándares.
9.2.5 Añadir solución/muestra patrón y solución de anticuerpos: Añadir 50µl de solución patrón (kit suministrado) o muestra preparada a los pocillos correspondientes. Añada 50µl de solución de anticuerpo (kit suministrado). Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 30min a 4-8ºC con la cubierta.
9.2.6  lavar: Retirar la tapa suavemente y verter el líquido de los pocillos y enjuagar los micropocillos con 250µl de solución de lavado diluida (solución 4) en el intervalo  de 10s durante 4-5 veces.  Absorba el agua residual con papel absorbente (la burbuja de aire restante puede eliminarse con la punta no utilizada).
9.2.7 Añadir conjugado enzimático:  Añadir  100μl  de conjugado enzimático (kit suministrado) a cada pocillo, mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 30min a 25ºC con la cubierta.  Repita el paso de lavado de nuevo.
9.2.8 coloración: Añadir 50µl de solución A(Kit suministrado) y 50µl de solución B(Kit suministrado) a cada pocillo. Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente e incubar durante 15min a 25ºC con la cubierta (ver 12,8).
9.2.9  medida: Añadir 50µl de solución de parada (kit suministrado) a cada pocillo. Mezclar suavemente balanceando la placa manualmente y medir la absorbancia a 450nm (se sugiere medir con la doble longitud de onda de 450/630nm. Leer el resultado en 5min después de añadir la solución de parada).  
10. Resultados
10,1 Porcentaje de absorbancia
Los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se dividen por el valor de absorbancia del primer patrón (patrón cero) y se multiplican por 100%. El patrón cero se hace así igual al 100% y los valores de absorbancia se citan en porcentajes.
   
B --patrón de absorbancia (o muestra)
B0 --patrón de absorbancia cero
10,2 curva estándar
----para trazar una curva estándar: Tomar  el valor de absorbancia de los patrones como eje y, semi logarítmico de la concentración de  la solución patrón de cefitiofur (ppb) como eje X.
---- la concentración de cefalosporinas de cada muestra (ppb), que puede leerse en la curva de calibración, se multiplica por el factor de dilución correspondiente de cada muestra seguida, y se obtiene la concentración real de la muestra.
Por favor note:
Para la evaluación del resultado, se ha desarrollado un programa informático especial, que puede proporcionarse a petición.
11. Sensibilidad, precisión y precisión
Sensibilidad de la prueba: 0,5ppb
Límite de detección
Tejido animal........... …....... ….2ppb
Leche............................ ….. …5ppb
Precisión
Tejido (cerdo, carne de res, pollo) …....... 80±20%
Tejido (pescado y camarón)... …80±20%
Leche........................ …....... …100±20%
Precisión
El coeficiente de variación del kit ELISA es inferior al 10%.
12. Aviso
12,1 los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se reducirán si los reactivos y las muestras no se han regulado a temperatura ambiente (20-25ºC).
12,2 no permita que los micropocillos se sequen entre pasos para evitar una reproducibilidad incorrecta y opere el siguiente paso inmediatamente después de tocar el soporte de micropocillos.
12,3. Agite cada reactivo suavemente antes de usarlo.
12,4. Mantenga su piel alejada de la solución de parada porque es la solución 0,5m H2SO4.
12,5 no use los kits desfasados. No cambie los reactivos de diferentes lotes, o de lo contrario caerá la sensibilidad.
12,6 mantener los kits ELISA a 2-8ºC, no congelar. Selle las placas de micropocillos de reposo, evite la luz solar directa durante todas las incubaciones. Se recomienda cubrir las placas de microtitulación.
12,7  la solución sustrato debe abandonarse si se vuelve de color.  Los reactivos pueden volverse malos si el valor de absorbancia (450/630nm) del patrón cero es inferior a 0,5(A450nm<0,5).
12,8 la reacción de coloración necesita  15min después de la adición de la solución A y la solución B. y usted puede prolongar el tiempo de incubación de 20min a más si el color es demasiado ligero para ser determinado. Nunca exceda de 25min, por el contrario, acorte el tiempo de incubación adecuadamente.
13. Almacenamiento
    Condiciones de almacenamiento: 2-8ºC.
Periodo de almacenamiento: 12 meses

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