Aflatoxina M1 Kit Elisa para leche

• Environmental Protection: Yes
• Certification: CE/ISO
• Color: White
• Classification: Food Diagnostic
• Function: Food Testing
• Appearance: Liquid
• No. de Modelo.: KA07201H
• Paquete de Transporte: Foam Box with Ice Bag
• Especificación: 96T/Kit
• Marca Comercial: kwinbon
• Origen: China
• Código del HS: 38229000
• Capacidad de Producción: 50000PCS/Year

Descripción de Producto

Inmunoensayo enzimático competitivo para el análisis cuantitativo de la aflatoxina M1

 

1. Antecedentes

Aflatoxin M1 es una especie de aflatoxin. La tasa de aparición es muy alta en alimentos y piensos en zonas calientes y húmedas. La propiedad fisicoquímica de la misma es estable y no es fácil de destruir por la pasteurización. Después de la ingesta de mamíferos el alimento o alimento contaminado por aflatoxina B1, se convierte en aflatoxina M1 con la media de hidroxilación. Los principales peligros de la aflatoxina M1 son la carcinogenicidad y la mutagenicidad. Puede destruir el hígado animal y provocar cáncer de hígado e incluso morir.
Este kit es una nueva generación de prueba de residuos de fármacos con tecnología de inmunoensayo enzimático. Tiene características de rapidez, comodidad, precisión y alta sensibilidad. El tiempo de funcionamiento solo necesita 60 minutos y puede reducir más el error de funcionamiento y la carga de trabajo.
2. Principio de prueba
Este kit ELISA está diseñado para detectar aflatoxina M1 a partir de  inmunoensayo enzimático "indirecto-competitivo".  Los pocillos de microtitulación están recubiertos con el antígeno de aflatoxina M1 ligado a BSA. La aflatoxina M1 de la muestra compite con el antígeno precoated para unirse al número limitado de anticuerpos. Después del sustrato TMB, la señal se mide con un fotómetro ELISA. La absorción es inversamente proporcional a la concentración de aflatoxina M1 en la muestra, en comparación con la curva estándar. A continuación, multiplique por la relación de dilución correspondiente.  Y puede calcular el residuo de aflatoxina M1 en la muestra.

3. Aplicaciones
Este kit puede usarse para pruebas rápidas cualitativas y cuantitativas de aflatoxina M1 en leche en polvo, leche cruda, queso, yoghourt, leche acabada (leche de cacahuete, leche de nuez, leche de desayuno, leche con alto contenido de calcio).

4. Reacciones cruzadas

Aflatoxina M1	100%
Aflatoxina B1	164%
Aflatoxina B2	14%
Aflatoxina G1	85%
Aflatoxina G2	<1%

5. Equipo necesario pero no proporcionado
5,1 equipos
----lector de ELISA (450nm/630nm)
--------------
---- mezclador vórtex
----equilibrio analítico (inductancia: 0,01g)
----pipeta graduada: 10ml
----Pipetón de goma
----tubo de centrifugación de poliestireno: 50ml, 2ml  
----Micropipetas: 20μL-200μl, 100μl-1000μl
multipipeta de 50 300μl
5,2 reactivos
----  Acetonitrilo (AR)
--- - triclorometano (AR)
--- - N-hexano (AR)
----agua desionizada
6. Componentes del kit

1. Placa de microtitulación con 96 pocillos recubiertos de antígeno
2. Soluciones estándar (6 botellas × 1ml/botella)

0ppb, 0,03ppb, 0,09ppb, 0,27ppb, 0,81ppb, 2,43ppb

1.  Conjugado enzimático 12ml...........
2. Solución de anticuerpos 7ml ......... .....green cap
3. Solución de sustrato A   7ml ..........
4. Solución sustrato B 7ml..................tapón rojo
5. Detener la solución 7ml ..........tapa amarilla
6. 20×solución de lavado concentrada 40ml
7. ....................….tapa transparente
8. 2× solución de extracción concentrada  50ml... tapón azul

7. Preparación de reactivos
Solución 1: Solución de extracción
Diluir la solución de extracción concentrada de 2 con  agua desionizada en la proporción de volumen de 1:1(1ml de 1ml×solución de extracción concentrada + 2 de agua desionizada), que se utilizará para diluir la muestra.
Solución 2: Solución de lavado
Diluir la solución de lavado concentrada de 20×con agua desionizada en la proporción de volumen de 1:19(p. ej 5ml de 95ml×solución de lavado concentrada + 20 de agua desionizada), que se utilizará para enjuagar las placas. La solución de lavado diluida puede conservarse durante un mes a 4ºC.
8. Preparaciones de muestra
8,1 Aviso y precauciones antes de la operación:
(A) por favor, use puntas de una sola vez en el proceso de experimento, y cambie las puntas cuando absorba diferentes reactivos.
b) Asegúrese de que todos los instrumentos experimentales estén limpios.
c)la muestra de leche no tratada debe almacenarse en un entorno congelado.
D) las muestras tratadas no pueden almacenarse más de 4 horas.
8,2 leche (leche cruda, leche acabada)
Tomar 50μl de muestra de leche para analizar directamente.
8,3 Yoghourt
----mezclar la muestra de yogurt en cuco completamente.
------ Tomar una muestra de 200μl de yogurt después de mezclarla en un tubo de centrífuga de poliestireno 2ml.
----- Añadir 800μl de solución de lavado (ver solución 2), agitar para mezclarla completamente;
------ Tome 50μl para el ensayo.
8,4 leche en polvo
----Peso 1,0±0,05g de muestra de leche en polvo en un tubo de centrífuga de poliestireno 50ml.
----Añadir 8ml solución desionizada y agitar para mezclarla completamente.
----tomar 50μl para el ensayo.
8,5 Queso
----Mata la muestra de queso antes de la detección.
----Peso de 0,05g±1,0 muestras de queso en 50ml tubos de centrífuga de poliestireno. Añadir 3ml agua desionizada, añadir 3ml acetonitrilo, vórtex para mezclarla completamente.
--- - centrífuga de separación: 3000G / 20-25ºC/ 5min.  Tome  3ml del sobrenadante en un tubo seco limpio de 50ml. Añadir 6ml triclorometano y vórtex para 15s.
-----  Centrífuga para separación: 3000G / 20-25ºC/ 5min. Retire el sobrenadante y tome 3ml de la fase orgánica inferior en un tubo de vidrio limpio de 10ml.  Secar con un baño de agua de 50-60ºC(122-140ºF)bajo flujo de nitrógeno.
----Añadir 1ml n-hexano y vórtex para 1min. Añadir 1ml solución de extracción (solución 1) y vórtex para 20s. Centrífuga para separación: 3000G / 20-25ºC/ 5min.
----Eliminar la fase orgánica sobrenadante y tomar 50μl de la solución inferior para el ensamblaje.
9. Proceso de ensayo
9,1 Aviso antes del ensayo
9.1.1 Asegúrese de que todos los reactivos y micropocillos estén a temperatura ambiente (20-25ºC).
9.1.2 Volver todos los reactivos restantes a 2-8ºC inmediatamente después de su uso.
9.1.3 el lavado correcto de los micropocillos es un paso importante en el proceso de ensayo; es el factor vital para la reproducibilidad del análisis ELISA.
9.1.4 Evite la luz solar directa durante la incubación, lo que significa que la placa debe cubrirse con la cubierta de la placa que se proporciona en el kit.
9,2 pasos de ensayo
9.2.1 sacar todos los reactivos a temperatura ambiente (20-25ºC) durante más de 30min. Agite suavemente antes de usar.  
9.2.2 saque los micropocillos necesarios y devuelva el resto a la bolsa de cierre a 2-8ºC inmediatamente.
9.2.3 la solución de lavado concentrada y la solución de extracción concentrada deben ponerse a temperatura ambiente antes de su uso.
9.2.4 número: Numere cada posición de micropocillo y todos los patrones y muestras deben ser analizadas por duplicado. Registre las posiciones de las muestras y los estándares.
9.2.5 Añadir patrón/muestra y  solución de anticuerpos: Añadir 50µl de solución patrón (componente del kit) o muestra preparada a los pocillos correspondientes. Añada 50µl de solución de anticuerpo (componente del kit). Mezclar suavemente agitando la placa manualmente e incubar durante 30min a 25ºC con la tapa (o en lugar oscuro).
9.2.6  lavar: Retirar la tapa suavemente y verter el líquido de los pocillos y enjuagar los micropocillos con 250µl de solución de lavado diluida (solución 2) en el intervalo de 10s durante 4-5 veces. Absorba el agua residual con papel absorbente (la burbuja de aire restante puede eliminarse con la punta no utilizada).
9.2.7 Añada el conjugado enzimático: Añada 100uL de conjugado enzimático a cada pocillo y agítelo suavemente. Incubar durante 30min a 25ºC con la tapa (o en lugar oscuro).   Y luego repita el paso 9,2.6.
9.2.8  coloración: Añadir 50µl de solución A (componente del kit) y 50µl de solución B (componente del kit) a cada pocillo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente e incubar durante 15 min a 25ºC con la tapa (ver 12,8).
9.2.9  medida: Añadir 50µl de solución de tope (componente del kit) a cada pocillo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente y medir la absorbancia a 450nm (se sugiere medir con la doble longitud de onda de 450/630nm. Leer el resultado en 5min después de añadir la solución de parada). (Si no hay lector de microplacas, puede juzgarlo por método visual sin solución de parada).

10. Resultados
10,1 Porcentaje de absorbancia
Los valores medios de absorbancia obtenidos de los patrones y de las muestras se dividen por el valor de absorbancia del primer patrón (patrón cero) y se multiplican por 100%.
   =
B --el valor de absorbancia medio de cada patrón o de cada muestra
B0 --valor de absorbancia de patrón cero
(2)curva estándar
---trazar una curva estándar, el valor de absorbancia de los patrones como eje y, semilogarítmico de la concentración de los patrones (ppb) como eje X.
---la concentración de aflatoxina M1 de cada muestra  (ppb), que puede leerse en la curva de calibración, se multiplica por el factor de dilución correspondiente de cada muestra seguida, y se obtiene la concentración real de la muestra.
Por favor note:
Se ha desarrollado un programa informático especial para la reducción de todos los datos,  que puede proporcionarse a petición.
Relación de dilución de la muestra:
Muestra de leche (leche cruda, leche acabada):...1
Yogur, queso: ...... ….5
Leche en polvo: .................... …..8
11. Sensibilidad, precisión y precisión
Sensibilidad de la prueba: 0,03ppb
Límite de detección
Leche.................... …...... …0,03ppb
Queso, Yoghourt …0,15ppb
Leche en polvo........................ 0,25ppb
Precisión
Leche ............................ …85 ± 15%
Yogurt..................... 85%±15%
Leche en polvo ..................... ….85%±15%
Queso .................... …85 ± 15%
Precisión
El valor de C.V. del kit ELISA es inferior al 10%.
12. Aviso
12,1 los valores medios de absorbancia obtenidos para los patrones y las muestras se reducirán si los reactivos y las muestras no se han regulado a temperatura ambiente (20-25ºC).  
12,2 no permita que los micropocillos se sequen entre pasos para evitar una reproducibilidad incorrecta y opere el siguiente paso inmediatamente después de tocar el soporte de micropocillos.
12,3. Agite  cada reactivo suavemente antes de usarlo.
12,4. Mantenga su piel alejada de la solución de parada porque es la alta concentración de solución H2SO4.
12,5 no use los kits desfasados. No cambie los reactivos de diferentes lotes, o de lo contrario caerá la sensibilidad.
12,6 mantener los kits ELISA a 2-8ºC, no congelar. Selle las placas de micropocillos de reposo, evite la luz solar directa durante todas las incubaciones. Se recomienda cubrir las placas de microtitulación.
12,7 la solución sustrato debe abandonarse si se vuelve de color.  Los reactivos pueden volverse malos si el valor de absorbancia (450/630nm) del patrón cero es inferior a 0,5(A450nm<0,5).
12,8 la reacción de coloración necesita 15min después de la adición de la solución A y la solución B, pero puede prolongar los intervalos de tiempo de incubación a 20min o más si el color es demasiado ligero para ser determinado, nunca más de 25min, por el contrario, acortar el tiempo de incubación adecuadamente.
12,9 la mejor reacción de temperatura será de 25ºC. Asegúrese de que la temperatura es correcta durante todos los pasos. Una temperatura más alta o más baja puede provocar un fallo en el experimento.  
13. Almacenamiento
Condiciones de almacenamiento: 2-8ºC.
Período de almacenamiento: 12months